鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞系 , PC-12細胞5×10^5以上/1ml
對于大多數細胞研究工作者來說,鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞系 , PC-12細胞污染那可是個糟糕的事情,也是比較容易出現的情況,我們如何防范,如何避免,是我們要學習和掌握的。
人催產素(OT)ELISA試劑盒 Human oxytocin,OT ELISA KIT 96T/48T
人妊娠相關血漿蛋白A(PAPP-A)ELISA試劑盒 Human pregnancy associated plasma protein A,PAPP-A ELISA KIT 96T/48T
鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞系 , PC-12細胞人抗子宮內膜抗體(EMAb)ELISA試劑盒 Human Endometrium Antibody,EMAb ELISA KIT 96T/48T
人抗精子抗體(AsAb)ELISA試劑盒 Human anti-sperm antibody,AsAb ELISA KIT 96T/48T
人妊娠皰疹抗體(HG)ELISA試劑盒 Human Herpes Gestation,HG ELISA KIT 96T/48T
人胎盤生長因子(PLGF)ELISA試劑盒 Human placenta growth factor,PLGF ELISA KIT 96T/48T
小鼠FMS樣*激酶3配體(Flt3L)ELISA試劑盒 Mouse FMS-like tyrosine kinase 3 ligand,Flt-3L ELISA KIT 96T/48T
下面我們對細胞培養(yǎng)中常見的污染情況,做個總結:
1)原蟲:培養(yǎng)液可輕微渾濁,顯微鏡下那些細小的點狀物數量非常多,輕微活動,細胞雖然可以生長但繁殖速度卻明顯減慢,而且細胞狀態(tài)不好,邊緣不清楚,細胞不透亮。他們與細胞可共生但會與細胞爭奪營養(yǎng)。這種共生是非常普遍的,但他們的數量小,細胞站優(yōu)勢所以不會影響到細胞的正常生長,只有當他們到達一定的數量時就會影響到細胞的生長,zui終形成惡性循環(huán)。
2)霉菌:培養(yǎng)液是清亮的,倒置顯微鏡下無雜質,37度孵箱培養(yǎng)2-3天,仍清亮,但出現絮狀雜質,鏡下可見呈細絲狀的團狀漂浮物,可看到明顯的菌絲,細胞仍可生長,但時間長之后,細胞的活力狀態(tài)變差,用硫酸銅溶液擦拭CO2孵箱內,再把水盤里也加上飽和量的硫酸銅?;蛘咴谂囵B(yǎng)箱的托盤加入飽和的消毒*高鹽液體,可以防止霉菌污染。CO2孵箱被霉菌污染后,可把所有細胞暫時轉移,采用過氧乙酸擦洗孵箱(包括隔板,箱壁)。并把過氧乙酸放置在孵箱內一個小時,使其蒸汽彌漫。待過氧乙酸的氣味消散后,再移入細胞。孵箱應定期清潔(2月左右),尤其在多雨的季節(jié)。其它培養(yǎng)箱清洗方法是:用84液擦洗-清水擦洗-75%酒精擦洗-紫外燈照。預防霉菌污染,可在培養(yǎng)基里加3u/ml的兩性霉素或*或*或雙抗;但細胞一旦污染,很難挽救,*或*或雙抗都于事無補,建議舍棄該污染細胞。,將環(huán)境*消毒,如果所有細胞都污染,可能是系統(tǒng)污染,檢查一下培養(yǎng)基和器材,如果只是個別污染,可能是操作問題,就要注意操作。
3)細菌:細菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀,根據感染細菌的不同,可有不同的外形,培養(yǎng)液一般會渾濁變黃,對細胞生長影響明顯。仔細檢查一下器皿的滅菌情況,是否在高壓滅菌時放氣時間足夠,壓力足夠!尤其是和儲存培養(yǎng)液接觸的移液管等物品,連續(xù)兩次污染的話有可能造成儲存液污染,一定要注意!下次使用前檢查一下培養(yǎng)液是否存在渾濁的現象! 可在培養(yǎng)液中加相應的抗生素處理
4)黑蛟蟲:可以穿透濾膜,也可以通過空氣傳播,低倍下為黑色點狀,高倍下可看見黑色的小蟲游來游去,培養(yǎng)液也是不渾的,一般不會太影響,細胞還是可以用的。常常是細胞生長狀態(tài)良好,且觀測到的運動物無明顯增多,且培養(yǎng)液顏色、透明度無明顯變化,可在同一批號的血清養(yǎng)的細胞中發(fā)現類似現象。對細胞生長狀態(tài)不會有明顯影響,在細胞增殖旺盛之后會自然消失,除更換血清外無須特殊處理。建議如果細胞有可能是此種污染的話,可以增加細胞的種板密度,以提高細胞的生存率。
5)真菌:一般培養(yǎng)液清亮,不變色,鏡下有絲狀物,有些真菌開始很像死細胞碎片,只是它很多很多的小塊很清楚,象珊瑚狀,不象細胞碎片分不清,慢慢的會長出很細的黑色絲狀物。真菌生長的比較慢,不象細菌那么容易被發(fā)現,但是一旦發(fā)現有它的存在細胞就被污染了,也很難救活了。
6)支原體:黑色的,好象多為多形,培養(yǎng)液一般培養(yǎng)液一般會渾濁,原體感染,國內血清很多都沒有做支原體陰性檢測,而支原體是牛血清中zui常見的微生物之一。而且它不能用過濾的辦法除去。支原體感染細胞以后,細胞病變不很明顯,只是慢慢死去。用泰樂菌素,獸用支原體病的藥,但可用于細胞培養(yǎng),無任何不良反應。Sigma公司的使用時用50ug/ml Tylosin培養(yǎng)液培養(yǎng)6天或連續(xù)傳兩代即可清除支原體污染。如果作為常用的抗生素的話, 建議用8ug/ml的濃度。
污染的可能原因:可能原因很多比如配液消毒問題、操作問題、環(huán)境問題等等關于培養(yǎng)基的無菌狀況,取培養(yǎng)基至培養(yǎng)瓶中(不加細胞),37度試培養(yǎng)一段時間后觀察。如果沒有細菌生長就是操作的問題。 也可以在培養(yǎng)基中事先加入雙抗(*和氨芐*)。但雙抗有時會影響細胞的狀態(tài),所以在做轉染、檢測細胞某項指標前一定要撤去雙抗,以避免影響實驗結果。1、孵箱應定期用三氧機消毒或者 紫外光照射,并用酒精和新潔爾滅試擦孵箱同時孵箱內的水應是三蒸水2、超凈臺\取材\器材\培養(yǎng)液\培養(yǎng)瓶\操作等因素3、超凈臺的風機不能過大,風機到6-8格。否則也可能能致霉菌污染4、無菌室經甲醛熏蒸消毒后,可用同等量的氨水噴灑中和,約幾小時即可進入操作。
人金葡菌腸毒素(SE)ELISA試劑盒 Human staphylococcus aureus enterotoxins,SE ELISA KIT 96T/48T
人鈣聯(lián)蛋白(CNX)ELISA試劑盒 Human calnexin,CNX ELISA KIT 96T/48T
人繆勒管抑制物質/抗繆勒管激素(MIS/AMH)ELISA試劑盒 Human Mullerian Inhibiting Substance/Anti-Mullerian hormone,MIS/AMH ELISA KIT 96T/48T
人β細胞素(BTC) ELISA試劑盒 Human beta cellulin,BTC ELISA KIT 96T/48T
人胎球蛋白A(FETU-A)ELISA試劑盒 Human Fetuin A,FETU-A ELISA KIT 96T/48T
人胎盤核糖核酸抑止劑(HPRI)ELISA試劑盒 Human placental ribonuclease inhibitor,HPRI ELISA KIT 96T/48T
人胎盤蛋白(PP)ELISA試劑盒 Human placental protein,PP ELISA KIT 96T/48T
人胎盤催乳素(HPL)ELISA試劑盒 Human placenta lactogen,HPL ELISA KIT 96T/48T
人胎兒血紅蛋白(HBF)ELISA試劑盒 Human anti-cytomegalovirus IgM antibody,anti-CMV IgM ELISA KIT 96T/48T
人抗巨細胞病毒抗體IgM(anti-CMV IgM)ELISA試劑盒 Human anti-cytomegalovirus IgM antibody,anti-CMV IgM ELISA KIT 96T/48T
人抗弓形體IgM抗體(anti-tox IgM)ELISA試劑盒 Human anti-toxoplasma IgG antibody,anti-tox IgG ELISA KIT 96T/48T
人抗風疹病毒IgG抗體(anti-RV IgG)ELISA試劑盒 Human anti-rubella virus IgG antibody,anti-RV IgG ELISA KIT 96T/48T
人抗EB病毒抗體(EBV)ELISA試劑盒 Human anti-Epstein-Barr virus antibody,EBV ELISA KIT 96T/48T
人孕酮受體(PGR)ELISA試劑盒 Human progesterone receptor,PGR ELISA KIT 96T/48T
人新生兒促甲狀腺素(N-TSH)ELISA試劑盒 Human Neonatal Thyroid Stimulating Hormone,N-TSH ELISA KIT 96T/48T
人妊娠特異性β1糖蛋白(SP1/PSβ1-G)ELISA試劑盒 Human Pregnancy Specificβ1Glycoprotein,SP1/PSβ1-G ELISA KIT 96T/48T
人胎盤泌乳素(PL)ELISA試劑盒 Human placetal lactogen,PL ELISA KIT 96T/48T
人雄激素結合蛋白(ABP)ELISA試劑盒 Human Androgen Binding Protein,ABP ELISA KIT 96T/48T
人抗滋養(yǎng)膜細胞抗體(ATA)ELISA試劑盒 Human anti-trophoblast antibody,ATA ELISA KIT 96T/48T
人抗透明帶抗體(aZP)ELISA試劑盒 Human anti-zona pellucida antibody,aZP ELISA KIT 96T/48T
人抗卵巢抗體(AOAb)ELISA試劑盒 Human Anti-Ovary Antibody,AOAb ELISA KIT 96T/48T
人抗巨細胞病毒抗體IgG(anti-CMV IgG)ELISA試劑盒 Human anti-cytomegalovirus IgG antibody,anti-CMV IgG ELISA KIT 96T/48T
人堿性胎兒蛋白(BFP)ELISA試劑盒 Human basic fetoprotein,BFP ELISA KIT 96T/48T
人抗風疹病毒IgM抗體(anti-RV IgM)ELISA試劑盒 Human anti-rubella virus IgM antibody,anti-RV IgM ELISA KIT 96T/48T