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pCold-SUMO-10His原核蛋白表達試劑盒

參  考  價:7488
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1 kit 7488元 10盒可售

更新時間:2023-11-30 14:33:56瀏覽次數(shù):295次

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適用領(lǐng)域 科研
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pCold-SUMO-10His原核蛋白表達試劑盒

蛋白相關(guān)

1 kit

BJ-PJ6666

 

描述:本試劑盒所包含的原核表達載體(pCold-SUMO-10His)是在 pCold-SUMO 載體基礎(chǔ)上改造而成,

該載體啟動子(CS Promoter)來源于南極嗜冷細菌,在低溫下(15 度)才能啟動蛋白的表達。低溫下細菌生長緩慢,使得蛋白合成速度減慢,從而最大限度的提高了蛋白正確折疊的幾率,提高了蛋白可溶性表達,增強了活性蛋白的表達比率。該表達系統(tǒng)所包含的 SUMO tag 可以極大地提高小分子量蛋白的表達量,而且進一步提高了蛋白的可溶表達幾率。同時,TEE 信號肽可增強冷啟動子調(diào)控下目的蛋白的高表達。
改進后的 pCold-SUMO-10His 載體,其 SUMO 蛋白標簽含有 10 個組氨標簽(10His tag),使其結(jié)合 Ni-NTA 的能力更強。與較早版本的 pCold-SUMO 表達系統(tǒng)相比,pCold-SUMO-10His 表達系統(tǒng)在保留了原有統(tǒng)的蛋白可溶性能生產(chǎn)能力、高特異性剪切能力的情況下,對 Ni-NTA 結(jié)合能力的得到明顯提高。其對 Ni-NTA 結(jié)合能力的提高,

在以下三個方面改善了生產(chǎn)重組蛋白的性能:

(1)提高了粗蛋白樣品中目標蛋白的捕獲能力,從而提高純化產(chǎn)量;

(2)在蛋白純化過程中可以
使用更高濃度的咪唑進行漂洗,去雜蛋白的能力明顯提升,從而獲得更高純度的重組蛋白;

(3)在重組蛋白酶切去除 SUMO標簽后,利用 Ni-NTA 去除 SUMO 標簽更為,獲得純度更高的無標簽?zāi)繕说鞍住?br style="box-sizing: border-box; margin: 0px;"/>關(guān)于宿主菌的使用:本試劑盒配備了兩種宿主表達菌感受態(tài)細胞,Lyophilized Arctic (DE3)感受態(tài)和 LyophilizedBL21(DE3) Chaprone 感受態(tài),兩種感受態(tài)均為凍干品形式可長期保存在-20℃,效價無明顯下降(2~10X10e5 cfu/μg)。
通常在質(zhì)粒載體的構(gòu)建完成,并測序驗證后,可將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入該感受態(tài)進行蛋白表達。該宿主菌僅為蛋白表達生產(chǎn)用,不可以進行載體構(gòu)建和質(zhì)粒的提取制備。由于 pCold-SUMO 系統(tǒng)的高可溶性表達特性,在大多數(shù)情況下重組蛋白在 LyophilizedArctic (DE3)感受態(tài)即可獲得理想的可溶表達,因此實驗請選用 Lyophilized Arctic (DE3)感受態(tài)宿主菌。

在 LyophilizedArctic (DE3)感受態(tài)宿主菌可溶表達效果不理想的情況下,再選用操作相對復(fù)雜的、帶有輔助折疊伴侶分子的 LyophilizedBL21(DE3)Chaprone 宿主菌,該系統(tǒng)可獲得最佳的可溶表達。除此外,pCold-SUMO 系統(tǒng)在常規(guī) BL21(DE3)、BL21(DE3)plys等宿主菌內(nèi)均可獲得可觀的可溶性表達。
關(guān)于蛋白酶的使用:試劑盒配備了 SUMO 蛋白酶(酵母來源,也稱為 UIP 蛋白酶)和 rTEV 蛋白酶,在第一步載體構(gòu)建過程中需要評估、考慮兩個蛋白酶的使用策略。SUMO 蛋白酶識別蛋白結(jié)構(gòu),切割活性高、酶切,對于需要去除 Tag的重組蛋白其是。個別情況下 SUMO 標簽的結(jié)構(gòu)會受到 C 端重組目標蛋白的影響,使得 SUMO 蛋白酶對重組融合蛋白的切割效率降低、甚至是無效,此時再選用 rTEV 蛋白酶進行酶切。由于 rTEV 蛋白酶識別氨基酸序列,個別重組融合蛋白會包埋識別序列,因此也會導致蛋白酶切效率下降。由于重組融合蛋白結(jié)構(gòu)的無法預(yù)測性,因此在實驗過程中兩種蛋白酶的酶切均需要測試。無論如何,通常 SUMO 蛋白酶具有更高的效率。本試劑盒配備的 SUMO 蛋白酶可以識別 SUMO標簽結(jié)構(gòu)(SDSEVNQEAKPEVKPEVKPETHINLKVSDGSSEIFFKIKKTTPLRRLMEAFAKRQGKEMDSLRFLYDGIRIQADQTPEDLDMEDNDIIEAHREQIGG)切割位點位于 QIGG 之后。SUMO 蛋白酶含有雙 His 標簽,保證了 SUMO 蛋白酶高親力的結(jié)合 Ni-NTA,以最大限度的去除 SUMO 蛋白酶(分子量約 26kD)。rTEV 蛋白酶可以識別 SUMO 標簽后面的 Glu-AsnLeu-Tyr-Phe-Gln-Gly (ENLYFQG)氨基酸序列,并在識別位點 Gln-Gly(QG)之間進行切割,從而去除 SUMO 標簽。rTEV 蛋白酶含有 6XHis 標簽(分子量約 30kD),可使用 Ni-NTA 純化介質(zhì)去除。
本試劑盒配備的 pCold-SUMO-10His-Positive Plasmid 為蛋白表達陽性質(zhì)粒,該質(zhì)粒含有 43kD 的目標蛋白,其與SUMO 標簽(19kD)融合后分子量約為 62kD。該表達質(zhì)粒在 Arctic (DE3)中即可獲得良好的表達。其可以僅可做為表達、酶切實驗的陽性對照品。


下列是公司正在出售的產(chǎn)品:

鋅指蛋白253抗體 英文名;ZNF253

細胞質(zhì)膜微囊蛋白-2抗體 英文名;Caveolin-2

癌癥/睪丸抗原103抗體 英文名;Semenogelin I/CT103

TOMM40抗體 英文名;TOMM40

Cullin2抗體

類固醇受體激活蛋白3抗體

磷酸化鈣介質(zhì)素抗體 英文名;phospho-Caldesmon (Ser789)

ARF鳥苷酸交換因子BIG1抗體

Cullin1抗體 英文名;Cullin 1

跨膜蛋白TMED4抗體 英文名;TMED4

微小染色體維持缺陷蛋白2抗體 英文名;MCM2

ARCH抗體 英文名;ZBTB8OS/ARCH

Ras信號轉(zhuǎn)導KSR1蛋白抗體 英文名;KSR1

酸性核糖體磷蛋白大亞基P0抗體 英文名;RPLP0

角蛋白82抗體

PE-Cy7標記人CD1a單克隆抗體 英文名;human CD1a/PE-Cy7

AbBy Fluor® 488標記的小腦肽2抗體

肌間蛋白3抗體

間隙連接蛋白45抗體 英文名;Connexin-45

1號染色體開放閱讀框185抗體

AbBy Fluor? 405標記的小腦肽2抗體 英文名;

活化T細胞核因子胞漿相互作用蛋白2抗體 英文名;NFATC2IP

銜接蛋白α-Adaptin抗體

1號染色體開放閱讀框183抗體 英文名;C1orf183

鋅指蛋白462抗體

pCold-SUMO-10His原核蛋白表達試劑盒磷酸化緊密連接蛋白6抗體

 


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