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產(chǎn)地 | 國產(chǎn) | 加工定制 | 是 |
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適用領(lǐng)域 | 科研 |
實驗過程:
一、腦膜炎敗血金黃桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μ
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測
三、腦膜炎敗血金黃桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒注意事項
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。好設(shè)立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。 ?
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:馬兜鈴LAMP鑒定試劑盒說明書
英文名稱:Fructus aristolochiae
貨號:YSP9330
產(chǎn)品規(guī)格:50次
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年 ?
適用范圍【參考值】
1.試劑盒有效性判定:
(1)陽性對照:有典型S型擴(kuò)增曲線或Ct值≤35。
(2)陰性對照:Ct值>38或無Ct值,線形為直線或輕微斜線,無指數(shù)增長期。
2.標(biāo)本結(jié)果判定:
(1)陽性:標(biāo)本檢測結(jié)果Ct值≤35或有明顯指數(shù)增長期。
(2)可疑:標(biāo)本檢測結(jié)果Ct值在35~38范圍內(nèi)。此時應(yīng)對標(biāo)本進(jìn)行重復(fù)檢測,如重復(fù)實驗結(jié)果Ct值仍在35~38范圍內(nèi),有明顯指數(shù)增長期,則判定為陽性,否則為陰性。
(3)陰性:標(biāo)本檢測結(jié)果Ct值>38或無Ct值。
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中小檢出率為3個細(xì)菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板。可直接用臨床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
IFN- Beta/IFNB(Mouse Interferon Beta) ELISA Kit 小鼠β干擾素4-氰基苯酸 98%L-亮氨酸 99%anti- VDAC1 antibody
anti- VDAC1/Porin antibody
IFN- Beta/IFNB(Human Interferon Beta) ELISA Kit 人β干擾素檸嗪酸 97%(T)硫酸新霉素 USP級,680 I.U./mganti- VDAC1/Porin antibody
anti- VDAC2 antibody
IFN- Beta/IFNB ELISA Kit 大鼠β干擾素4-腈 98%硫酸新霉素 分析標(biāo)準(zhǔn)品anti- VDAC2 antibody
anti- VDAC3 antibody
IFN Alpha-Ab(Human Interferon AlphaAntibody) ELISA Kit 人抗α干擾素抗體L-(-)樟腦磺酸 99%硫酸新霉素 USP級anti- VDAC3 antibody
anti- VDR antibody
IFN- Alpha/ BetaR(Human Interferon Alpha/ BetaReceptor) ELISA Kit 人α/β干擾素受體D(+)樟腦磺酸 99%L-纈氨酸 99%anti- VEGF antibody
Anti- VEGF antibody
IFN- Alpha(Mouse Interferon Alpha) ELISA Kit 小鼠α干擾素(±)-樟腦-10-磺酸 99%活性炭 AR,200目,粉末狀,褐色anti- VEGFC antibody
anti- VEGFR-1/FLT-1 antibody
IFN- Alpha(Human Interferon Alpha) ELISA Kit 人α干擾素基烯酸烯酯, 包含50-185 ppm MEHQ穩(wěn)定劑, 98%活性炭 CP,200目,粉末狀,褐色anti- VEGFR2 antibody
anti- VEGFR3 antibody
IFN- Alpha ELISA Kit 大鼠α干擾素基烯酸芐基酯 98%活性炭顆粒 AR,20-50目anti- Vertnin antibody
anti- VEZT antibody
Ifi205(Human interferon activated gene 205) ELISA Kit 人干擾素活化基因205二基烯酸1,3-二醇酯, 含200 ppm MEHQ穩(wěn)定劑, 95%活性炭 電鍍脫色,40-60目,from Nutshellanti- VGAT antibody
anti- VGLL1 antibody
IFI16/p16(Mouse interferon-inducible protein 16) ELISA Kit 小鼠γ干擾素誘導(dǎo)蛋白16/p16二基烯酸1,4-二醇酯, 含100ppm MEHQ 穩(wěn)定劑, 95%活性炭 電鍍脫色,200目,from woodanti- VGLL4 antibody
anti- VGLUT1 antibody
馬兜鈴LAMP鑒定試劑盒說明書細(xì)胞高純分離試劑盒 愈創(chuàng)木酚臂板蛋白4C檢測試劑盒
細(xì)胞總蛋白萃取試劑盒 磷鉬酸臂板蛋白3F檢測試劑盒
細(xì)胞總核蛋白萃取試劑盒 5-硝基-6-氯代苯-3-磺酸鈉鹽臂板蛋白3A檢測試劑盒
細(xì)胞核蛋白核堿性蛋白(nuclear basic protein)萃取試劑盒 2-萘酚-1磺酸鈉鹽吡哆醛/吡哆醇維生素B6磷酸酶檢測試劑盒
細(xì)胞膜蛋白萃取試劑盒 二氯熒光黃吡哆醛/吡哆醇維生素B6激酶檢測試劑盒
細(xì)胞表面蛋白(surface protein)萃取試劑盒 間苯二酚鼻病毒檢測試劑盒
精漿蛋白(semen plasma protein)萃取試劑盒 1-萘酚苯酸諾龍/苯酸去睪酮檢測試劑盒
線蟲細(xì)胞分離試劑盒 二苯胺磺酸鋇本周蛋白檢測試劑盒
細(xì)胞ATP生物發(fā)光法定量檢測試劑盒 對羥基苯酸胞質(zhì)動力蛋白檢測試劑盒
細(xì)胞總抗氧化能力(TAC)化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒 半二酚橙胞外超氧化物歧化酶檢測試劑盒
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