我公司提供的吲哚乙酸氧化酶活性檢測(cè)試劑盒100管/96樣規(guī)格方法分類(lèi)：紫外分光光度法、可見(jiàn)分光光度法、微量法、酶法、高效液相色譜法本方法提供代測(cè)服務(wù)!咨詢(xún)！
產(chǎn)品名稱(chēng)：吲哚乙酸氧化酶活性檢測(cè)試劑盒100管/96樣規(guī)格
規(guī)格：100管/96樣
測(cè)試方法：微量法
測(cè)定意義：
吲哚乙酸（IAA）在吲哚乙酸氧化酶的作用下，被氧化破壞失去活性。植物體內(nèi)吲哚乙酸氧化酶活力的大小，對(duì)調(diào)節(jié)體內(nèi)吲哚乙酸的水平，起著重要的作用，而影響植物的生長(zhǎng)。
測(cè)定原理：
在無(wú)機(jī)酸存在情況下，吲哚乙酸能與FeCl3作用，生成紅色螯合物，該物質(zhì)在530nm處有Z大吸收峰，酶活力的大小可以其破壞吲哚乙酸的速度表示之。吲哚乙酸的含量可用比色法測(cè)定。
自備儀器和用品：
低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、1.5mL離心管、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸餾水。
吲哚乙酸氧化酶活性檢測(cè)試劑盒100管/96樣規(guī)格成及試劑配制
1：預(yù)包被板: 96T/48T
2：酶標(biāo)記抗體: (30倍濃縮)HRPIgG,親合純化 0.4mL x 1
3：標(biāo)準(zhǔn)品: -6 0.5mL x 2
4：EIA緩沖液: 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 30mL x 1
5：標(biāo)記抗體稀釋液: 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 12mL x 1
6：顯色劑: TMB底物液 15mL x 1
7：終止液: 1N 12mL x 1
8：濃縮洗滌液: (40倍濃縮) 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 50mL x 1
操作步驟：
1. 取出試劑盒，室溫（20-25℃）放置 30 分鐘。
2. 分組：取出 96 孔板，根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)，把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理。分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn) 品組（6 個(gè)濃度）、空白孔、待測(cè)樣品組。 注：為減少實(shí)驗(yàn)誤差，保證準(zhǔn)確性，建議設(shè)置復(fù)孔。
3. 加樣：依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入 50ul 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中；空白對(duì)照孔加入 50ul 的蒸餾水；其余微孔中加入 50ul 的待測(cè)樣本。
4. 加酶標(biāo)溶液：標(biāo)準(zhǔn)品組、待測(cè)樣本組各孔中加入 100ul 的酶標(biāo)溶液（空白對(duì)照孔除外）。
5. 溫育：酶標(biāo)板用封板紙密封后，放入濕盒內(nèi)于 37℃恒溫孵育 1 小時(shí)。
6. 洗板：用稀釋后的洗滌液注滿(mǎn)每孔，靜置 15-30s，充分清洗酶標(biāo)板 5 次，用吸水紙*拍干。 7. 顯色：各孔加入顯色劑 A 液 50ul 后，再加入顯色劑 B 液 50ul。
8. 終止：25-37℃下避光反應(yīng) 10-15 分鐘，加入 50ul 終止液。

吲哚乙酸氧化酶活性檢測(cè)試劑盒100管/96樣規(guī)格注意事項(xiàng)：
1. 實(shí)驗(yàn)操作中必須使用一次性吸頭，避免交叉污染。
2. 加樣：加樣時(shí)，要控制加樣速度，避免*孔與Z后一孔間的時(shí)間間隔過(guò)大，否則將會(huì)導(dǎo)致不同的預(yù)孵育時(shí)間，從而影響 實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性以及重復(fù)性。
3. 孵育：嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)上規(guī)定的孵育時(shí)間和溫度進(jìn)行。
4. 反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化，如果顏色較深，請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)。
5. 建議實(shí)驗(yàn)前預(yù)測(cè)樣品含量，如樣品濃度過(guò)高，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋?zhuān)?jì)算結(jié)果時(shí)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
6. 建議使用本試劑盒時(shí)先做預(yù)實(shí)驗(yàn)（即先做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，試用幾個(gè)標(biāo)本），如果對(duì)本試劑盒有任何疑問(wèn)，可和所購(gòu)經(jīng)銷(xiāo)商， 如果因運(yùn)輸過(guò)程導(dǎo)致試劑盒失效，可要求調(diào)換，但概不承擔(dān)產(chǎn)品本身以外的任何損失。

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ASBT 頂膜鈉依賴(lài)性膽鹽轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白抗體
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AADACL3 芳香乙酰胺脫乙酰基酶樣蛋白3抗體
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phospho-ATF2 (Thr51 + Thr53) 磷酸化活化復(fù)制因子2抗體
phospho-ATF2 (Thr69 + Thr51) 磷酸化活化復(fù)制因子2抗體
phospho-ATF2 (Thr73 + Thr55) 磷酸化活化復(fù)制因子2抗體
phospho-ATF2 (Thr71 + Thr53) 磷酸化活化復(fù)制因子2抗體
phospho-ATF2(Thr71) 磷酸化活化復(fù)制因子2抗體

9. 讀板：在 450nm 波長(zhǎng)讀取各孔的 OD 值。 注：讀板時(shí)必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡，讀板時(shí)間控制在終止反應(yīng)后的 30 分鐘內(nèi)，以免影響準(zhǔn)確性。
數(shù)據(jù)計(jì)算
1. 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)：各標(biāo)準(zhǔn)品 OD 值減去底色即減去空白孔 OD 值，以 6 個(gè)標(biāo)準(zhǔn) 品的 OD 值為縱坐標(biāo) y，以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo) x，繪制曲線(xiàn)圖，如圖示， 并計(jì)算出回歸方程 y=ax+b。
2. 將待測(cè)樣品的 OD 值代入方程式，計(jì)算各組樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即 為樣品的實(shí)際 ABP 濃度。
3. 敏感度：1.0 pg/ml