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【儀器心得】飛諾美色譜柱測(cè)定17種氨基酸

2025年03月21日 17:14

　　Phenomenex Gemini NX C18色譜柱測(cè)定17種氨基酸

　　實(shí)驗(yàn)室沒(méi)有自動(dòng)氨基酸分析儀，通過(guò)柱前衍生建立了HPLC測(cè)定種游離氨基酸。

　　1.儀器與試劑

　　氨基酸混合標(biāo)準(zhǔn)品，購(gòu)自中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院，碳酸氫鈉，二硝基氟苯，磷酸二氫鉀，DMF(N,N-二甲基甲酰胺)，乙酸鈉均為分析純，乙腈為色譜級(jí)，超純水。Phenomenex Gemini NX C18(4.6 mm×250 mm, 5 μm)，液相色譜儀配置UV檢測(cè)器(LC-20AT)日本島津。

　　液相色譜條件。流動(dòng)相：A為0.05 mol/L乙酸鈉(pH=6.4，含0.1% N,N-二甲基甲酰胺和10%乙腈)，B為乙腈:水(體積比為1:1)；流速：1.0 mL/min；柱溫：35 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：360 nm；進(jìn)樣量：10 μL，梯度洗脫。梯度洗脫：0-8 min:(82%A)，8-14min(72%A)，14-34min(72%A)，34-35min(68%A)，35-40min(68%A)，40~41min

　　(40%A)，41-60min(5%A)，后面加一個(gè)平衡柱子的程序。

　　2.標(biāo)準(zhǔn)品處理

　　取混合標(biāo)準(zhǔn)溶液0.1 mL于10 mL容量瓶中，加入0.5 mL 0.5 mol/L NaHCO3溶液，調(diào)pH到8.5，加入0.5 mL 1%二硝基氟苯衍生化試劑，混勻后60 ℃恒溫水浴60 min，然后用0.1 mol/L KH2PO4試液定容至10 mL，上機(jī)檢測(cè)。植株樣品，稱(chēng)取一定量的樣品，水回流提取0.5-1h,按照標(biāo)準(zhǔn)品步驟進(jìn)行衍生，然后上機(jī)測(cè)定。

　　3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

　　采用柱前衍生法測(cè)定植株中的游離氨基酸，采用液相色譜法進(jìn)行檢測(cè)，由圖1可知，各氨基酸對(duì)應(yīng)的峰分離效果較好

　　圖1 游離氨基酸液相色譜圖,(1:天冬氨酸；2:谷氨酸；3:絲氨酸；4:甘氨酸；5:精氨酸；6:蘇氨酸；7:脯氨酸；8:谷氨酸；9:纈氨酸；10:甲硫氨酸；11:胱氨酸；12:異亮氨酸；13:亮氨酸；14:苯丙氨酸；15:組氨酸；16:賴(lài)氨酸；17:酪氨酸)

　　總結(jié)：使用Phenomenex Gemini NX C18色譜柱對(duì)于測(cè)定和分離17種游離氨基酸非常好用，沒(méi)有經(jīng)費(fèi)置辦氨基酸分析儀的可以選擇這種方法進(jìn)行測(cè)定，色譜柱比較耐用，峰型分離比較好。

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